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資料簡介

“上?;Χ?rdquo;文獻:加味當歸芍藥散抑制組蛋白乙?;缸饔沒蒲芯?br />李燕紅 楊 謙 李錦亮 莊錦填 李振潔 鐘金寶

【摘     要】   目的     探討加味當歸芍藥散抑制組蛋白乙?;福穡常埃埃ǎ穡常埃埃齲粒裕寤芳友趺福玻ǎ茫希兀玻┩返骺睪艘蜃?E2相關因子2(Nrf2)在黃褐斑形成中的作用機制。方法     健康人表皮黑素細胞及30只雌性小鼠納入研究,采用不同濃度加味當歸芍藥散處理健康人表皮黑素細胞,肌肉注射黃體酮及紫外線照射建立黃褐斑小鼠模型,將小鼠隨機分為空白組、低劑量組及高劑量組各10只,分別給予常規劑量0.9%氯化鈉注射液、低劑量及高劑量加味當歸芍藥散處理,檢測不同濃度處理下細胞活力、細胞黑素含量及細胞中p300HAT、COX-2及 Nrf2的 RNA 及蛋白表達量,同時檢測治療前后3組小鼠皮膚及肝臟的p300HAT、COX-2及 Nrf2的 RNA、蛋白質表達量。結果加味當歸芍藥散濃度為1.0mg/mL 時健康人表皮黑素細胞活力較對照組明顯低,差異有統計學意義(P <0.05);加味當歸芍藥散處理的健康人表皮黑素細胞p300HAT、COX-2的 RNA 及蛋白表達量和黑素相對含量較對照組明顯低,Nrf2的 RNA 及蛋白表達量較對照組明顯高,且隨著加味當歸芍藥散濃度增加,健康人表皮黑素細胞 p300HAT、COX-2、Nrf2的 RNA 及蛋白表達量降低、升高越明顯,健康人表皮黑素細胞黑素相對含量降低越明顯,差異有統計學意義(P <0.05);治療后僅低劑量、高劑量組p300HAT、COX-2的 RNA、蛋白表達量較治療前明顯降低,Nrf2的RNA、蛋白表達量明顯升高,且治療后高劑量組各項指標變化較低劑量組明顯,差異有統計學意義(P <0.05)。結論   加味當歸芍藥散治療黃褐斑的機制可能與其抑制p300HAT/COX-2通路調控 Nrf2表達有關。
【關鍵詞】   黃褐斑; 環氧化酶2; 加味當歸芍藥散; p300HAT; Nrf2
黃褐斑屬于臨床常見面部皮膚黑色素沉著疾病,易診難治,病因與日曬、內分泌失調、遺傳、情緒 及化妝品等有關,臨床對其治療尚缺乏單一特效藥。近年來,運用各種中藥治療黃褐斑并取得了一定的臨床療效[1]。現階段臨床對黃褐斑發病機制尚未完全明確,一項研究表明環加氧酶-2(COX-2)催化花生   四烯酸合成的具有生物學活性的前列腺素衍生物可進一步轉化成消炎、抗氧化的親電羰基衍生物分子, 并可解離轉錄因子核因子 E2 相關因子2(Nrf2),激活多種與抗氧化相關的含抗氧化反應元件(ARE)應答元件的基因,COX-2調控 Nrf2可能與其抗炎及抗氧化機制有緊密聯系[2],其在黃褐斑形成中可能發揮一定作用,此 外 COX-2 的表達與共激活因子p300HAT 的轉錄調控相關[3]。而近期一項研究指出當歸芍藥散具有顯著的抗氧化、清除自由基等作用[4],因而本項目在既往研究基礎上開展檢測加味當歸芍藥散作用人表皮黑素細胞生長情況以及組蛋白乙?;福穡常埃埃ǎ穡常埃埃齲粒裕?、COX-2 及 Nrf2 的表達水平,并建立黃褐斑小鼠模型,對其實行加味當歸芍 藥 散 灌 胃 處 理 , 并 檢 測 小 鼠 皮 膚 、 肝 臟 的
p300HAT、COX-2及 Nrf2 的表達水平,通過體外細胞實驗及體內動物實驗研究,探討加味當歸芍藥散治療黃褐斑的有關機制。
1 材料與方法
1.1  材料:30只雌性昆明種小鼠由上海西普爾-必凱實驗動物中心提供,小鼠體質量18~20g,平均體質量(19.6±0.3)g;健康人表皮黑素細胞株由中南大學湘雅醫學院腫瘤研究所提供。主要試劑及儀器:①主要試劑:由南京建成生物工程有限公司提供的丙二醛試劑盒(批號:20130517)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(批號:20140319)、總蛋白定量測試盒(批號:20140319),由上?;Χι錕萍加邢薰咎峁┑睦野?酸 酶 酶聯 免 疫 吸 附 試 驗(ELISA)試劑盒,由上海通用藥業股份有限公司提供的黃體酮注射液(批號:130404),四甲基偶氮唑藍、二甲基亞砜由上?;郎錒こ坦咎峁?;②主要儀器:中波紫外線治療儀由 Sigma 公司提供,DG3022A 型酶標儀由華東電子管廠提供,由美國Milipore公司提供的 Direct-Q 型超純水儀,德 國
IKA 公司提供的IKA T18B 型組織勻漿機,美國Beckman公司提供的 Couvter高速冷凍離心機。

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